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检测细胞毒性实验对比

来源:英格尔医药 发布时间:2020-12-23

  首先我们来看一下CCK8与MTT的实验原理。


  CCK-8实验:


  实验原理:


  全称为Cell Counting Kit-8,在电子载体1-Methoxy PMS存在的情况下能够被细胞内脱氢酶还原成水溶性的甲臜染料,生成的(橙黄色)甲臜量与活细胞数量成正比,即颜色的深浅与细胞的增值成正比。因此可以用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。


  注意事项:


  1、酚红和血清对CCK-8法的检测不会造成干扰,可以通过减去空白孔中本底的吸光度而消除。


  2、CCK-8试剂的颜色为淡红色,与含酚红的培养基颜色接近,不注意的话容易产生漏加或多加。


  3、当在培养箱内培养时,培养板最外一圈的孔容易干燥挥发,导致体积不准确而增加误差。一般情况下,最外一圈的孔只加培养基,不作为测定孔用。


  4、金属对CCK-8显色有影响:终浓度为1mM的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会5%、15%、90%的抑制显色反应,使灵敏度降低。如果终浓度是10mM,将会100%抑制显色反应。


  5、部分悬浮细胞由于染色比较困难,一般需要增加细胞数量并延长培养时间。


检测细胞毒性实验对比


  实验原理:


  全称为3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,商品名:噻唑蓝,是一种接受氢离子的黄颜色染料,可作用于活细胞线粒体中的呼吸链,在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂,生成蓝色的formazan结晶,formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比(死细胞中琥珀酸脱氢酶消失,不能将MTT还原)。还原生成的formazan结晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠(pH 4.7)的MTT溶解液中溶解,利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值,以反映出活细胞数目。也可以用DMSO来溶解。


  英格尔医药建议注意事项:


  1、在用酶标仪检测结果的时候,为了保证实验结果的线性,MTT吸光度最好在0-0.7范围内。


  2、MTT一般最好现用现配,过滤后4℃避光保存两周内有效,或配制成5mg/ml保存在-20℃长期保存,避免反复冻融


  3、避免血清干扰:一般选小于10%的胎牛血清的培养液进行试验。在呈色后尽量吸尽孔内残余培养液。


  4、设空白对照:与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照。其他试验步骤保持一致,最后比色以空白调零。


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