基因毒性杂质危害很大，需要严格控制其在药物中的限制，以确保用药安全。基因毒性杂质的检测面临着杂质种类多、化学性质活跃等问题，分析方法复杂多样，对药物中基因毒性杂质的检测方法提出了很高的要求。

　　1.基因毒性杂质的研究思路

　　限量检查基因毒性杂质。药物中基因毒性杂质的具体研究思路如下：

　　①根据药物合成过程中使用的初始材料、试剂和催化剂，结合可能的化学反应，推测药物中可能引入的基因毒性杂质并对其进行分类。

　　②最大限度地确定杂质的可接受性。

　　③开发药物中基因毒性杂质的检测方法。

　　④建立专属性强、稳定性好、灵敏度高、分析速度快的分析方法，并进行方法学验证。

　　⑤确定样品中基因毒性杂质的限度是否符合要求。

　　2.基因毒性杂质的来源

　　原料药合成的起始材料、反应中间体、催化剂和试剂是药物中基因毒性杂质的来源。

　　此外，基因毒性杂质也会在药物合成、制剂生产、储存或运输过程中产生，因此药物中基因毒性杂质的来源贯穿于药物生产和流通的整个过程。

　　①基因毒性试剂(genotoxic reagents):合成过程中使用的原料、反应试剂或催化剂本身具有警告结构，并在合成过程中引入中间体或粗药物。

　　②基因毒性合成产物(genotoxic synthetics):在药物合成过程中，两种或两种以上的合成材料或试剂在一定的化学反应条件下产生具有警告结构的杂质，可能是副产物或药物合成中间体。

　　③基因毒性降解产物(genotoxic degradants):原料药或制剂本身没有警示结构，但在储存或运输过程中发生氧化或还原反应，最终产生警示结构的杂质。

　　3.基因毒性杂质的分类

　　目前，为了确定某种物质是否具有基因毒性，主要通过毒理学评价手段补充体外Ames实验，辅以部分体内实验。

　　自然界中有成千上万种化合物。在实际研究工作中，很难判断药物合成过程中涉及的化合物是否具有高成本、长周期的基因毒性杂质。

　　通过对化学物质结构和毒理学活性的研究，一些官能团或亚结构单元可以与生物体中的一些功能分子发生反应，导致基因突变。这些官能团或亚结构单元对生物活性有警示作用，统称为“警示结构”。

　　利用这种“警示结构”来判断化合物是否具有基因毒性，使药物中基因毒性杂质的确定更快、更有针对性，极大地促进了药物中基因毒性杂质的研究。

　　Ashby总结了一些易致癌化学物质的结构单元，并提出了具有18种警示结构的化合物模型，即“超级致癌物”

　　4.基因毒性杂质的限制

　　EMA于2004年发布的基因毒性杂质限制指南（草案）采用了“最低合理可行”的概念，不可能默许全面消除风险。因此，建议使用毒理学关注阈值TTC作为基因毒性杂质的可接受限制。

　　5.基因毒性杂质的检测方法

　　基因毒性杂质的化学结构有很多种。如何选择最适合特定基因毒性杂质的分析方法是药物中基因毒性杂质研究的重点和难点。

　　基因毒性杂质种类繁多，药物含量低，结构差异大，因此对不同的待测物质选择不同的样品预处理方法。

　　基因毒性杂质研究的重点和难点是如何提高检测方法的灵敏度和专属性。

　　基因毒性杂质检测方法集中在以下三个方面：

　　①选择先进的分析仪器，如GC-MS，LC-MS质谱检测器的高灵敏度适用于微量或痕量物质的检测，具有良好的专属性。

　　②衍生技术：衍生方法可以提高基因毒性杂质的稳定性或产生易于检测的衍生产物，提高分析检测的灵敏度。

　　③基质钝化：通过提取或SPE去除大部分基质，减少对待物体的干扰，达到丰富待测物体的目的，提高分析方法的灵敏度。

　　6.基因毒性杂质的研究难点和问题

　　针对基因毒性杂质限制低、结构多样、化学性质活跃等特点，研究面临诸多困难，主要表现在以下方面。

　　①基因毒性杂质种类繁多，理化性质差异较大。可能需要开发多种研究方法来检测某种药物中的基因毒性杂质，每种方法的研究结果相互补充，以满足测量要求。

　　②基因毒性杂质稳定性差。基因毒性杂质大多含有活跃的官能团，容易与介质发生反应，或容易氧化、还原或分解。在样品分析过程中，可能需要添加稳定剂或衍生物来解决稳定性问题。

　　③基因毒性杂质的限制较低。为了达到设定的检测限制，通常在检测过程中准备高浓度的试验产品。

　　在液体方法检测中，高浓度试验产品可能会沉淀、堵塞色谱柱、污染离子源、基质效应和干扰试验产品的峰值，从而增加试验难度。在实际研究中，溶剂成分可以改变，以便试验产品沉淀或SPE等方法，以去除高浓度的基质。

　　在设定液体条件时，主要成分的色谱峰也可以切割出质谱。

　　④药物在降解过程中产生的基因毒性杂质检测难度大，相关报道少，相关方应注意降解产物的基因毒性杂质。

　　⑤溶解性问题。一般来说，试验产品浓度高，选择合适的溶液体系，完全溶解潜在的基因毒性杂质，确保检测结果的可靠性；基因毒性杂理化性质差异较大。在实验初期，应选择合适的溶剂，使控制产品完全溶解，溶剂不干扰物体测量。

　　溶剂还可能影响待测物体的稳定性。

　　⑥一些未知物质对测定产生不确定性的影响。

　　有些药物的光学异构体具有基因毒性。制剂中异构体的检测可采用正相色谱。通常，辅助材料的干扰应通过丰富和衍生来消除，以提高检测的灵敏度。

　　⑦基因毒性杂质的限制较低。一般需要使用液相质谱或气相质谱联合技术。质谱检测方法作为药物的日常检测，增加了企业的成本。

　　⑧企业对药品工艺路线中涉及的基因毒性杂质来源的评价不全面。

　　对初始材料、试剂、溶剂等可能带来的基因毒性物质没有充分考虑，对过程中可能产生的基因毒性杂质也没有充分评价。