基因毒性杂质危害性大，需要严格控制其在药物中的限度，保障用药安全。基因毒性杂质的检测面临杂质种类多和化学性质活泼等问题，分析方法复杂多样，从而对药物中基因毒性杂质的检测方法提出了很高的要求。

　　因毒性杂质的研究思路

　　将药物中的基因毒性杂质完全除去实际操作难度很大，ICH，EMA和FDA均颁布了相关的基因毒性杂质控制指导文件，推荐以毒理学关注阈值(threshold of toxicological concern，TTC，1.5μg·d-1)来控制用药风险。

　　TTC具体含义为在人的一生(70岁)中，每天摄入1.5μg基因毒性杂质，其致癌的风险是可接受的(＜1/100 000)。

　　所以在实际的检测中，基因毒性杂质采用限度检查的方法。药物中基因毒性杂质的具体研究思路如下:

　　①根据药物合成工艺中使用的起始物料、试剂和催化剂等，结合可能发生的化学反应推测药物中可能引入的基因毒性杂质并对其进行分类。

　　②确定杂质可接受的最大限度。

　　③开发药物中基因毒性杂质的检测方法。

　　④建立专属性强、稳定性好、灵敏度高、分析速度快的分析方法，并进行方法学验证。

　　⑤对供试品进行测定，确认样品中基因毒性杂质的限度是否符合要求。

　　基因毒性杂质的来源

　　药物中基因毒性杂质的来源有原料药合成的起始物料、反应中间体、催化剂和试剂等。

　　此外，在药物的合成、制剂生产、储存或运输过程中也会生成基因毒性杂质，所以药物中基因毒性杂质的来源贯穿药品的生产和流通整个过程。

　　本文将药物中基因毒性杂质的来源分为3类:

　　①基因毒性试剂(genotoxic reagents):药物在合成过程中使用的原料、反应试剂或催化剂，其本身具有警示结构，在合成反应过程中未反应完全而引入到中间体或药物粗品中。

　　②基因毒性合成产物(genotoxic synthetics):在药物的合成过程中，2个或多个合成物料或试剂在一定化学反应条件下生成具有警示结构的杂质，该类杂质可能是副产物也可能是药物合成中间体。

　　③基因毒性降解产物(genotoxic degradants):原料药或制剂本身不具有警示结构，但在储存或运输过程中发生氧化或还原等反应，最终生成具有警示结构的杂质。

　　基因毒性杂质的分类

　　为确定某种物质是否具有基因毒性，目前主要通过毒理学评估手段，以体外Ames实验为主，辅以部分体内实验进行补充。

　　自然界中化合物的种类成千上万，对药物合成过程中所涉及的化合物均进行毒理学评价，判别它们是否为基因毒性杂质的方法成本高、周期长，在实际研究工作中难以开展。

　　通过化学物质的结构与毒理学活性相关方面的研究，某些官能团或者亚结构单元，能与生物体内一些功能性的大分子发生反应，引起基因突变，这些官能团或者亚结构单元对生物活性具有警示作用，统称为“警示结构”。

　　在研究中利用这种“警示结构”来判断化合物是否具有基因毒性，使得药物中基因毒性杂质的确定更迅速、研究更具有针对性，极大方便了药物中基因毒性杂质的研究工作。

　　基因毒性杂质的检测方法

　　基因毒性杂质的化学结构种类繁多，如何针对特定的基因毒性杂质选择最合适的分析方法是药物中基因毒性杂质研究的重点和难点。

　　基因毒性杂质的研究难点和问题

　　针对基因毒性杂质限度低、结构多样、化学性质活泼等特点，研究面临诸多难点，主要表现在如下几个方面。

　　①基因毒性杂质的种类多，理化性质差异大。针对某一个药物中基因毒性杂质的检测可能需要开发多个研究方法，各方法的研究结果相互补充，以满足测定要求。

　　②基因毒性杂质的稳定性差的问题。基因毒性杂质多含有活泼的官能团，易和介质等发生反应或自身容易发生氧化、还原或分解反应等，在样品分析过程中可能需要加入稳定剂或者衍生化解决稳定性的问题。

　　③基因毒性杂质的限度较低。在检测中通常会配制高浓度的供试品，以达到设定的检测限。

　　在液质方法检测中，高浓度的供试品可能析出、堵塞色谱柱、污染离子源、基质效应以及干扰待测物出峰等问题，增加检测的难度。在实际研究中可以改变溶剂组分让供试品析出或SPE等其他方法，将高浓度的基质除去。

　　在设定液质条件时，还可以将主成分的色谱峰切出质谱。

　　④药物在降解过程产生的基因毒性杂质检测难度大，相关的报道也少，降解产物基因毒性杂质应该得到有关方面的关注。

　　⑤溶解性问题。一般供试品的浓度高，选择合适的溶样液体系，使得潜在的基因毒性杂质完全溶解，确保检出结果的可靠性;基因毒性杂理化性质差异大，在实验初期，要选择合适的溶剂，使得对照品完全溶解，同时溶剂对待测物无干扰。

　　溶剂还可能影响到待测物的稳定性。

　　⑥一些未知物质给测定带来不确定的影响。

　　某些药物其光学异构体具有基因毒性，对于制剂里面异构体检测可采用正相色谱，通常要通过富集和衍生化，去除辅料的干扰，提高检测的灵敏度。

　　⑦基因毒性杂质的限度低。一般需要使用液相质谱或者气相质谱联用技术，质谱检测方法作为药品的日常检测对于企业来说增加了成本。

　　⑧企业对药物工艺路线中涉及的基因毒性杂质来源评估不全面。

　　没有全面考虑起始物料、试剂、溶剂等可能带入的基因毒性物质，对工艺过程中可能产生的基因毒性杂质也没有充分评估等。