定性细胞毒性测试

　　医疗器械常用的三种 定性细胞毒性测试。直接接触 程序推荐用于低密度材料，例如隐形眼镜聚合物。 在这种方法中，将一块测试材料直接放置在培养基上生长的细胞上。然后培养细胞。在孵化过程中，测试材料中的可浸出化学物质会扩散到培养基中并与细胞层接触。测试样品的反应性通过测试材料周围细胞的畸形、变性和溶解来指示。

　　琼脂扩散测定适用于高 密度材料，例如弹性体封盖。在这种方法中，在培养的细胞上放置一层薄薄的营养补充琼脂。将测试材料(或在滤纸上干燥的测试材料的提取物)放置在琼脂层的顶部，并孵育细胞。测试材料下方和周围的畸形、退化或裂解细胞区域表明存在细胞毒性。

　　MEM 洗脱分析使用不同的 提取介质和提取条件来根据实际使用条件或夸大这些条件来测试设备。可以滴定提取物以产生细胞毒性的半定量测量。制备后，将提取物转移到一层细胞上并孵育。孵育后，用显微镜检查细胞的畸形、变性和细胞溶解。应对任何设备的每个组件进行至少一种类型的细胞毒性测试。

　　定量细胞毒性 - MTT 检测

　　最近关于器械生物相容性的法规 (ANSI/AAMI/ISO 10993-5:2009) 规定，定性细胞毒性测试(直接接触、mem 洗脱、琼脂扩散)适用于筛选目的，但定量评估更可取。

　　ISO 10993-5:2009 的附件 C 提到了 MTT 细胞毒性测定法，它可以准确量化低至 950 个细胞。MTT 是一种比色法，通过线粒体琥珀酸脱氢酶测量黄色 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑鎓的还原。由于细胞还原仅由活细胞催化，因此可以量化溶液中活细胞的百分比。

　　MTT 可用于评估以下物质的细胞毒性：

　　医疗器械可萃取材料

　　有毒化合物

　　毒素和环境污染物

　　潜在的抗癌药物

　　检测生长抑制潜力的抗体MTT 的主要优点是它的定量能力，它可以通过提取物或直接接触来完成，并且结果不受分析师解释的影响。此外，MTT 可以在标准阅读器(例如 Bio-Tek ELx808)中的 96 孔微孔板上进行，从而可以快速筛选多个样品。

　　然而，应该注意的是，虽然推荐使用 MTT，但 MTT 检测不能区分特定的细胞死亡机制——例如细胞凋亡与诱导的细胞死亡。此外，它可能低估了细胞损伤，仅在细胞死亡过程的最后阶段检测到死亡。

　　致敏试验

　　致敏性研究有助于确定一种材料是否含有在反复或长期接触后会导致不利的局部或全身影响的化学物质。这些过敏或超敏反应涉及免疫机制。可以使用来自测试材料的特定化学物质、测试材料本身或最常见的是测试材料的提取物来进行确定致敏潜力的研究。材料生物相容性矩阵建议对所有类别的医疗设备进行敏化测试。

　　豚鼠最大化测试 (Magnusson-Kligman 方法)推荐用于将与身体或体液进行外部通信或内部接触的设备。 在这项研究中，测试材料与完全弗氏佐剂 (CFA) 混合以增强皮肤致敏反应。

　　封闭 贴片 测试涉及多个局部剂量，建议用于仅接触完整皮肤的设备。

　　鼠 局部淋巴结检测 (LLNA) 可确定淋巴细胞对致敏剂的反应数量增加。如果一个分子充当皮肤致敏剂，它会诱导表皮朗格汉斯细胞将过敏原转运到引流淋巴结，进而导致 T 淋巴细胞增殖和分化。 从动物福利的角度来看，该测试优于豚鼠最大化测试或封闭斑块测试。