生物制品中HCP残留的检测

　　生物制药产品中的hcp具有诱导免疫原性效应的潜力，如诱导直接的抗体或受体介导的反应在患者体内产生临床效应，从而影响药物的安全性或有效性。因此，HCPs监控是生物制药生产过程中的关键质量属性(CQA)，其存在需要在研发和生产过程中进行监控、控制和记录。

　　美国药典(USP)和欧洲药典(EP)发布了关于HCP杂质检测策略的指导文件。ICH指导文件包括Q6B、ICH S6(R1)和ICH Q8(R2)。此外，FDA、欧洲药品管理局(EMA)和中国药典都有相应的指导性文件。

　　国家法规要求生物制药的宿主细胞蛋白HCP降低到可接受的水平，如USP的推荐值:最终产品的HCP水平为1-100 ng/mg。根据中国药典的各种理论，大肠杆菌的HCP不应高于蛋白质总量的0.10%，CHO细胞的不应高于蛋白质总量的0.05%。

　　许多生物制药公司利用这一范围来指导工艺开发和设定HCP限值。事实上，可接受的HCP水平是由监管机构逐案审查的。即使最终产品中微量的宿主细胞蛋白HCP进入患者体内，也不清楚特定的残留HCP杂质是否会影响药物的稳定性或具有免疫原性。

　　选择合适的HCP酶联免疫吸附试验。

　　酶联免疫吸附试验(HCP-ELISA)是分析HCPs的常用技术，它可以检测毫克产品中的HCP杂质。它具有高适用性、高通量、高灵敏度和高选择性的优点，但是该方法不能提供样品中单个hcp的身份和数量信息。

　　ELISA的检测价值取决于多种因素，包括宿主细胞系抗原的制备方法、免疫动物种类的选择、个体动物的免疫反应、ELISA中用于定量的HCP对照品等。ELISA得出的HCP检测值是综合动物免疫和抗体对HCP抗原反应的结果，可视为有免疫反应的HCP总量的“免疫当量”，但不等于“摩尔浓度”。

　　因为HCP是一组复杂的杂质，由数千种不同的蛋白质组成，在下游过程中可能与药物一起被共同纯化，生物制药商必须证明在纯化过程中去除了HCP。当生产规模扩大和纯化工艺改变时，有必要证明所选择的分析方法应该能够检测任何新产生的hcp，而无需开发新的分析方法。如果过程中出现错误，如色谱柱泄漏，分析方法应能检测出变化的HCP。HCP分析是针对原液的杂质分析，对最终产品中低含量的HCP也要有很高的灵敏度。

　　英格尔医药无论是使用商业、工艺还是特定产品的HCP-ELISA，都应确定其适用性，并对实际工艺和产品进行验证。包括验证代表样品的HCP参考物质的选择、检查定量稀释的线性、确定样品的灵敏度和定量限(LOQ)以及表征ELISA试剂，即HCP抗原和HCP特异性抗体。HCP的抗原必须是产品或过程特定细胞收获的样品，其包含最终可能进入最终产品的大部分HCP。特异性HCP抗体必须覆盖产品中可能存在的广谱HCP，这可以通过早期工艺样品或模拟样品的覆盖度分析来确定。中低水平HCP产物的高灵敏度和高特异性，即使在高药物蛋白存在的情况下，也不会与药物蛋白产生交叉反应，这也是ELISA的一个重要参数。