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细胞毒性
来源:英格尔医药 发布时间:2022-11-11
细胞毒性试验:细胞培养技术用于评估由装置、材料或药物引起的细胞死亡、细胞生长抑制或其他细胞效应。体外细胞毒性试验具有通用性,可广泛应用于各种医疗器械和材料的评价。然后检测样本的材料是否引起细胞损伤、细胞生长、细胞代谢变化,甚至死亡。可分为直接接触实验、间接接触实验和淋溶实验三种。
磁带引头
MTT全称为3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2,5-二苯基-2h-四氮唑溴化物,中文化学名为3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二甲基四氮唑溴化物,为黄色染料。这是一种检测细胞存活和生长的方法。主要原理是利用细胞线粒体中酶的活性,将特定的四氮唑盐转化,然后用酶标仪进行检测。具体原理是活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶可将外源性MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶甲,沉积在细胞内,而死细胞不具备此功能。二甲基亚砜(DMSO)可溶解细胞内沉积的甲形成紫色溶液,然后用酶联免疫吸附法检测570 nm波长(也可使用490 nm)下的OD值,可间接反映活细胞的数量。在一定的细胞数范围内,MTT晶体的数量与细胞数成正比。它具有灵敏度高、经济、方便的特点。
CCK-8
CCK-8(细胞计数试剂盒-8)检测是一种高灵敏度和非放射性的比色检测,用于在细胞增殖或细胞毒性试验中确定活细胞的数量。CCK-8是氧化还原反应的指示剂。该试剂中所含的WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二砜基苯)-2H-四唑单钠盐)在电子载体1-甲氧基PMS的存在下可以反应。用酶标仪在450 nm波长处测OD值,间接反映活细胞数。
CCK-8具有灵敏度高、重现性好、直接加入细胞样品、无需与其他成分预混、无需洗涤细胞、操作简便、无需有机溶剂、对细胞的细胞毒性低、检测准确等优点。可用于粘附细胞或悬浮细胞。基于上述优点,CCK-8检测方法被广泛应用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药物敏感性试验以及某些生物因子的活性检测等。
荧光发光(ATP发光)
三磷酸腺苷(ATP三磷酸)由腺嘌呤、核糖和三个磷酸基团组成。水解时会释放出更多的能量,这是生物体内最直接的能量来源。内源性ATP是活细胞最基本的能量来源,当细胞死亡时,ATP迅速水解。因此,测定细胞内内源性ATP的含量可以及时反映细胞的活性和活细胞的数量。
ATP发光法是通过检测细胞内ATP的含量来分析细胞的活性和增殖情况。常见的ATP发光法是利用外源萤火虫荧光素/荧光素酶与细胞内的ATP发生反应,将化学能转化为光能,通过监测荧光强度来检测ATP含量。在荧光素酶催化的发光反应中,ATP处于一定的浓度范围内,其浓度与发光强度成线性关系,发光强度对ATP进行定量。它灵敏、快速、方便、稳定。
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